新生小鼠心肌细胞分离试剂盒 AC-1002016

新生小鼠心肌细胞分离试剂盒 

产品基本信息 

产品名称 Applied Cell® 新生小鼠心肌细胞分离试剂盒 

货 号 AC-1002016 

规 格 1kit 

保存条件 详见产品内容 

使用范围 小鼠原代心肌细胞分离培养 

保 质期 12个月 

产品简介 新生小鼠心肌细胞分离试剂盒是埃泽思生物科技有限公司（Applied Cell®）开发的一款用于新生小鼠心脏原代心肌细胞分离和培养的产品。本产品提供一种简单高效的小鼠原代心肌细胞分离方法，该方法为基于心肌细胞的体外药物筛选以及yao物评估提供了非常好的原料。在细胞分离中，充分优化分离过程，以及培养试剂，获得高纯度、高活性的原代心肌细胞。使用本试剂盒进行细胞分离、培养的原代心肌细胞，可表达心肌细胞蛋白标记物和保持细胞收缩性。 

产品特性 采用二级消化法，特异性除去非心肌细胞，获得高纯度心肌细胞。 细胞贴壁效果更好、活性更高。 分离心肌细胞产量更高，损失更少。

产品内容 试剂 规格 数量 保存 Wash buffer 125ml 2瓶 2-8℃ Mouse Cell Dissociation SolutionⅠ 125ml 1瓶 -20--80℃保存 Mouse Cell Dissociation SolutionⅡ 125ml 1瓶 -20--80℃保存 Mouse Cardiomyocytes Culture Medium 125ml 2瓶 2-8℃ Ready-to-use Gel 100ml 1瓶 2-8℃ 

实验准备 A.使用75%酒精擦拭试验台； B.准备酒精灯、酒精棉及用于盛放实验处理后小鼠的垃圾袋； C.剪子、镊子、微型镊子等解剖用具需提前进行灭菌处理； D.吸取适量Wash Buffer至培养皿中并放置于冰上（细胞房内操作）。 注意：细胞房和**净工作台需提前进行紫外灭菌处理；培养皿大小的选择取决于实验时所取心脏的数目，Wash buffer一直放于冰上保持低温。

 操作方法 1.取心脏： A.左手捏住小鼠背部皮肤，使用酒精棉（95%酒精）擦拭小鼠胸腹，用解剖剪在小鼠剑突处正中线偏左向上剪开，略压胸骨，使心脏自然跳出，用弯镊子勾住心脏根部，取出心脏，置于盛有遇冷Wash buffer的培养皿中。 B.在解剖镜下使用微型镊子和解剖剪剪去心房。 2.组织清洗和预消化： A.经酒精擦拭后，将培养皿移入细胞房**净工作台，用遇冷的Wash buffer清洗3次，去除血污后，将心脏剪成约1mm3的组织块，再清洗2次， 3.将组织块移入培养瓶中，加入适量Mouse Cell Dissociation SolutionⅠ后放入4℃冰箱消化过夜。 注意：预消化时间可根据心脏数目进行调整，较多不**过24h。 第二天： 1.实验准备： 水浴锅温度调至37℃，将Wash Buffer放入水浴中加热。把心脏从4℃冰箱取出并将其中的心脏和消化液移入一个新的50ml离心管中，加入等量经预热的Wash Buffer, 37℃水浴锅中摇动消化1min后弃上清； 2.消化： A. 在50ml离心管中加入5ml Mouse Cell Dissociation SolutionⅡ，37℃水浴中摇动消化7min后将上清液加入遇冷的10ml Mouse Cardiomyocytes Culture Medium中，混合均匀并置于冰上保持低温。 注意：每次消化液使用的量可根据组织块的多少进行调整。 B. 重复2.A的步骤直至组织完全消化。 注意：吸取上清时尽量避免吸出沉淀。 C.将收集的上清在常温下1260rpm，离心5min。轻轻吸除上清，用Mouse Cardiomyocytes Culture Medium重悬细胞。 3.差速贴壁： A.将重悬的细胞经过100μm滤网过滤，直接接种到培养皿中，放入细胞培养箱（37℃，5%CO2）中孵育60-75min。 B.取上清移至新的培养皿中，重新放入细胞培养箱中孵育60-75min。 注意：孵育时间根据培养皿贴壁能力可做适当调整； 4．细胞铺板： A.将Mouse Cardiomyocytes Culture Medium预先在37℃水浴中加热。 B.取出培养皿，将上清移入15ml离心管中，530rpm，离心5min，轻轻吸除上清，用已经预先加热至37℃的2ml Mouse Cardiomyocytes Culture Medium重悬细胞。 C.利用血细胞计数板进行细胞计数，用台盼蓝检测细胞存活率。 D.根据所计的细胞数量使用Mouse Cardiomyocytes Culture Medium进行稀释调整细胞浓度，将细胞移至包被好的孔板或培养皿中。 E.将培养皿放入细胞培养箱中培养24h后观察细胞状态，若细胞状态佳且浓度合适，则可进行后续实验。