Xeno-Free间间充质干细胞培养基 AC-1001003

Xeno-Free人间充质干细胞培养基 

产品基本信息 

产品名称 Applied Cell ® Xeno-Free人间充质干细胞培养基 

货 号 AC-1001003 

规 格 基础培养基450mL，添加剂50mL 

运输保存条件 基础培养基2-8℃，添加剂-20℃至-80℃；混合后2-8℃ 

使用范围 人类骨髓、脂肪、脐带等组织来源的间充质干细胞 原代分离、扩增与传代培养 

保质期 12个月 

产品简介 Xeno-Free人间充质干细胞培养基是埃泽思生物（Applied Cell®）*的一款无外源动物成分的人间充质干细胞培养基。可应用于人骨髓、脂肪、脐带等组织来源的间充质干细胞的原代分离、扩增与传代培养，并保持其多向分化潜能。本产品内毒素水平远低于中国药典标准，生产过程遵循ISO9001体系,并符合GMP指导原则。 Xeno-Free人间充质干细胞培养基主要成分：氨基酸，维生素、无机盐、白蛋白，转铁蛋白、胰岛素、微量元素，细胞因子等。 

产品特性 无外源动物蛋白成分，大大降低各类病毒、霉菌和支原体等的污染风险。 全程无血清生产，较大降低批次间差异。 可用于原代分离，且培养过程*包被培养板。 扩增效率高，24h左右增殖翻倍，节省培养时间。 内毒素<0.06EU/ml，远低于中国药典水平

 组分 规格 数量 运输 Human Mesenchymal Stem Cell Basal Medium 人间充质干细胞基础培养基 450mL 1瓶 冰袋 Human Mesenchymal Stem Cell Supplement 人间充质干细胞添加剂 50mL 1瓶 干冰 产品内容 

相关产品 Serum-Free细胞冻存液（Applied Cell®: Cat. no.AC-1001006） 人脐带间充质干细胞（Applied Cell®: Cat. no.AC-2001003） 人脂肪间充质干细胞（Applied Cell®: Cat. no.AC-2001004） Xeno-Free细胞消化液（Applied Cell®: Cat. no. AC-1001024/1001025 ） 

实验准备 人间充质干细胞培养基配制 1.137℃快速解冻人间充质干细胞添加剂，快速溶解时不易破坏添加剂中营养物质，时间大致为10min。待添加剂融化后摇匀，分装或直接按比例添加到基础培养基中，分装后添加剂立即储存于-20℃至-80℃，避免反复冻融 。 1.2将添加剂以10%比例加入到人间充质干细胞基础培养基中，混匀，即为人间充质干细胞培养基（AC-1001003）。混合后培养基可在2-8℃ 稳定储存2-3周，不建议使用已配制**过3周的培养基。 1.3人间充质干细胞培养基可直接应用于人类骨髓、脂肪、脐带等组织来源的间充质干细胞的原代分离、扩增与传代培养。 操作方法(以下步骤皆应在无菌条件下操作) hMSC细胞复苏(10cm dish) 2.1 从中取出冻存的hMSC细胞，*将冻存管放入37℃水浴快速融解。 2.2 在生物*柜或**净台中，将解冻后的细胞悬液缓慢加入5 mL预温的人间充质干细胞培养基（AC-1001003）。 2.3 1000rpm 离心3 min，吸掉上清，加入10ml人间充质干细胞培养基重悬细胞。 2.4 将细胞均匀铺到培养皿中，水平十字振动培养皿使细胞均匀分布，5% CO2的37℃恒温细胞培养箱中培养24小时后观察细胞状态。 2.5 24h后更换新鲜人间充质干细胞培养基继续培养，每2-3天更换培养液。 hMSC细胞传代培养 1. 在显微镜下观察细胞，当细胞融合度达到90%，即可传代。 2. 在**净台/*柜中，吸掉原有培养基，加入PBS溶液清洗一次，加入Xeno-Free细胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆盖皿/瓶底。 3. 室温孵育4-5分钟或37℃孵育2-4分钟，显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。 4. 加入消化液2倍体积的人间充质干细胞培养基，用移液器轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞，并轻轻吹打混匀，使细胞完全分散。 5. 将细胞悬液转移到15 mL离心管中，1000 rpm离心3 min。 6. 弃上清，加入人间充质干细胞培养基，重悬细胞，计数。1：3-1：4比例传代，或按1-2x104 cells/cm2 传代，均匀铺在培养皿/瓶中，置于37℃，5%CO2 培养箱中培养。 注意：细胞传代所需的时间：2-4天。5代及之前的细胞，生长速度较快。5代以后的细胞，生长速度稍缓。 hMSC细胞冻存 1. 细胞达到90%汇合度， 吸掉原有培养基，PBS清洗一次。 2. 加入Xeno-Free细胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆盖皿/瓶底，室温孵育4-5min或37℃孵育2-4min分钟，显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。 3. 加入消化液2倍体积的人间充质干细胞培养基，用移液器轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞，并轻轻吹打混匀，使细胞完全分散。 4. 将细胞悬液转移到15 mL离心管中，1000 rpm离心3 min，吸掉上清。 5. 加入适量Serum-Free细胞冻存液（AC-1001006），调整细胞冻存密度在1×106 cells/mL左右，每支冻存管分装1.5-2ml。 6. 直接放入-80℃，24h后转入中长期保存。 质量控制 检验项目 Test Catagories 参考数据 Reference Data 结果 The results 外观 Physical APPearance 橙红色液体 Orange-red liquid 符合规定 Conform to the provisions 澄清度 Clarity 澄清 Clear 符合规定 Conform to the provisions pH值 Ph value 6.9-7.3 符合规定 Conform to the provisions 渗透压 Osmolality 270-340 （mosm/KgH2O） 符合规定 Conform to the provisions 细菌内毒素 Endotoxin 小于0.06 EU/ml 符合规定 Conform to the provisions 无菌 Sterility 无菌 Sterility 符合规定 Conform to the provisions 支原体 Mycoplasma 0.11um过滤，支原体试验为阴性 The mycoplasma test was negative after 0.11um filtration 符合规定 Conform to the provisions 细胞生长试验 Cell growth test 细胞为梭形，呈指纹状或螺旋状生长 The cells are spindle - shaped, fingerlike or spiral 符合规定 Conform to the provisions