人成纤维细胞无血清培养基 AC-1001015

人成纤维细胞无血清培养基 

产品基本信息 

产品名称 Applied Cell®人成纤维细胞无血清培养基 

货 号 AC-1001015 

规 格 500mL 

运输保存条件 基础培养基2-8℃，添加剂-20--80℃ 

使用范围 人真皮/肺/心脏等多种组织器官来源成纤维细胞培养 

保质期 12个月 

产品简介 人成纤维细胞无血清培养基是埃泽思生物科技有限公司（Applied Cell®）*的一款适用于人成纤维细胞培养的无动物源细胞培养产品。本产品应用人真皮、肺、心脏等多种组织器官来源成纤维细胞原代分离、扩增与传代培养，且不含动物血清，内毒素水平低于药典标准（<0.06EU/mL）。本产品生产过程遵循ISO9 001体系,并符合GMP指导原则。 

产品特性 无外源动物蛋白成分，大大降低各类病毒、霉菌和支原体等的污染风险。 全程无血清生产，较大降低批次间差异。 可用于原代分离。 内毒素<0.06EU/ml，远低于中国药典水平。 

组分 规格 数量 运输 人成纤维细胞基础培养基 450mL 1瓶 冰袋 人成纤维细胞添加剂 50mL 1瓶 干冰 

产品内容 相关产品 人真皮成纤维细胞（Applied Cell®: Cat. no.AC-2001005） Serum-Free细胞冻存液（Applied Cell®: Cat. no.AC-1001006） 人脐带间充质干细胞（Applied Cell®: Cat. no.AC-2001003） 人脂肪间充质干细胞（Applied Cell®: Cat. no.AC-2001004） 

操作方法 人成纤维细胞培养基配制 1.137℃快速解冻人成纤维细胞培养基添加剂，快速溶解时不易破坏添加剂中营养物质，时间大致为10min。待添加剂融化后摇匀，分装或直接按比例添加到基础培养基中，分装后添加剂立即储存于-20℃至-80℃，避免反复冻融 。 1.2将添加剂以10%比例加入到人成纤维细胞基础培养基中，混匀，即为人成纤维细胞培养基（AC-1001015）。混合后培养基可在2-8℃ 稳定储存2-3周，不建议使用已配制**过3周的培养基。 1.3人成纤维细胞培养基可直接应用于人真皮、肺、心脏等多种组织器官来源的成纤维细胞的原代分离、扩增与传代培养。 操作方法(以下步骤皆应在无菌条件下操作) 人成纤维细胞复苏(10cm dish) 2.1 从或-80℃冰箱中取出冻存的人成纤维细胞，*放入37℃水浴快速融解。 2.2 在生物*柜或**净台中，将解冻后的细胞悬液缓慢加入5 mL预温的人成纤维细胞培养基（AC-1001015）。 2.3 1000rpm 离心3 min，吸掉上清，加入10ml人成纤维细胞培养基重悬细胞。 2.4 将细胞均匀铺到培养皿中，水平十字振动培养皿使细胞均匀分布，5% CO2的37℃恒温细胞培养箱中培养24小时后观察细胞状态。 2.5 24h后更换新鲜人成纤维细胞培养基继续培养，每2-3天更换培养液。 人成纤维细胞传代培养 1. 在显微镜下观察细胞，当细胞融合度达到9 0%，即可传代。 2. 在**净台/*柜中，吸掉原有培养基，加入PBS溶液清洗一次，加入Xeno-Free细胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆盖皿/瓶底。 3. 室温孵育4-5分钟或37℃孵育2-4分钟，显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。 4. 加入消化液2倍体积的人成纤维细胞培养基，用移液器轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞，并轻轻吹打混匀，使细胞完全分散。 5. 将细胞悬液转移到15 mL离心管中，1000 rpm离心3 min。 6. 弃上清，加入人成纤维细胞培养基，重悬细胞，计数。1：2-1：4比例传代，或按2-5x104 cells/cm2 传代，均匀铺在培养皿/瓶中，置于37℃，5%CO2 培养箱中培养。 注意：人成纤维增殖情况与细胞密度密切相关，所以传代时细胞密度不宜过稀。 人成纤维细胞冻存 1. 细胞达到9 0%汇合度， 吸掉原有培养基，PBS清洗一次。 2. 加入Xeno-Free细胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆盖皿/瓶底，室温孵育4-5min或37℃孵育2-4min分钟，显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。 3. 加入消化液2倍体积的人成纤维细胞培养基，用移液器轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞，并轻轻吹打混匀，使细胞完全分散。 4. 将细胞悬液转移到15 mL离心管中，1000 rpm离心3 min，吸掉上清。 5. 加入适量Serum-free细胞冻存液（AC-1001006），调整细胞冻存密度在1×106 cells/mL左右，每支冻存管分装1.5-2ml。 6. 直接放入-80℃，24h后转入中长期保存。 质量控制 检验项目 Test Catagories 参考数据 Reference Data 结果 The results 外观 Physical APPearance 橙红色液体 Orange-red liquid 符合规定 Conform to the provisions 澄清度 Clarity 澄清 Clear 符合规定 Conform to the provisions pH值 Ph value 6.9-7.3 符合规定 Conform to the provisions 渗透压 Osmolality 270-340 （mosm/KgH2O） 符合规定 Conform to the provisions 细菌内毒素 Endotoxin 小于0.06 EU/ml 符合规定 Conform to the provisions 无菌 Sterility 无菌 Sterility 符合规定 Conform to the provisions 支原体 Mycoplasma 0.11um过滤，支原体试验为阴性 The mycoplasma test was negative after 0.11um filtration 符合规定 Conform to the provisions