人间充质干细胞成骨分化试剂盒 AC-1001027

人间充质干细胞成骨分化试剂盒 

产品基本信息 

产品名称 Applied Cell®人间充质干细胞成骨分化试剂盒 

货 号 AC-1001027 

规 格 1kit 

保存条件 基础培养基2-8℃，添加剂-20--80℃保存； 混合后2-8℃保存，2-3周内使用完毕 

使用范围 人间充质干细胞诱导分化成骨 

保质期 1年 

产品简介 人间充质干细胞成骨分化试剂盒是埃泽思生物（Applied CellTM）*的一款用于人间充质干细胞诱导成骨分化的产品，可用于骨髓、脐带、脂肪等组织来源的间充质干细胞的诱导成骨分化。 产品特性 诱导分化程序简单便捷。 诱导成骨细胞效率高。 

产品内容 试剂 规格 数量 运输 人间充质干细胞成骨分化基础培养基 90mL 1 瓶 冰袋 人间充质干细胞成骨分化添加剂 Osteogenic Differentiation Supplement 10mL 1瓶 干冰 

1.相关材料 • Xeno-Free人间充质干细胞培养基（Applied Cell®:AC-1001003） • 人间充质干细胞成骨分化试剂盒（Applied Cell®:AC-1001027） • 成骨检测染液（Applied Cell®:AC-1001021） • Xeno-Free细胞消化液（Applied Cell®:AC-1001024/1001025） • 盐缓冲液(1×PBS) （Applied Cell®: Cat.AC-1001037）

 2.实验准备 人间充质干细胞成骨分化培养基配制： 2.1 2-8℃解冻人间充质干细胞成骨分化添加剂，轻晃摇匀； 2.2 随后将添加剂依次加入到人间充质干细胞成骨分化基础培养基中（添加剂10mL与90mL基础培养基彻底混合）混匀，即为人间充质干细胞成骨分化培养基。人间充质干细胞成骨分化培养基可在2-8℃稳定储存2-3周。 注意：人间充质干细胞成骨分化添加剂只能在2-8℃解冻，待添加剂加入到培养基以后，请用培养基润洗添加剂试管1-2次，因添加剂量较少可防止添加剂粘附在试管壁上造成损失。 3.实验操作 3.1诱导成骨（以6孔板为例） 3.1.1 使用细胞细胞包被液包被细胞培养板，将传代或复苏冻存的人间充质干细胞接种到6孔板上，密度为2×105 -3×105 cells/cm2或2×105 -3×105 cells/孔，置于37℃，5% CO2培养箱中培养，当细胞汇合度达到80%-9 0%时，小心的将孔内人间充质干细胞培养基吸掉，向6孔板中加入2 mL人间充质干细胞成骨分化培养基,以此记为第0天； 注意：成骨分化*使细胞卷起，，成骨分化时应使用包被液包被细胞培养板。 3.1.2 每隔1-2天更换新鲜的人间充质干细胞成骨分化培养基； 注意：为防止成骨细胞脱落，建议成骨过程中出现大量钙结节之后，换液形式变为每天一次半量换液。 3.1.3 诱导14-21天期间，视细胞的形态变化及生长情况（如图1所示），可用成骨检测染液（Applied Cell:AC-1001021）进行染色。 3.2 成骨检测染液染色 3.2.1 诱导成骨分化结束后，吸掉6孔板中的成骨分化培养基，用PBS冲洗1-2次。每孔加入1 mL细胞固定液，固定10~30 min； 3.2.2 吸掉细胞固定液，PBS冲洗2次。每孔加入2 mL成骨检测染液，染色3-5 min； 3.2.3 吸掉成骨检测染液，用PBS冲洗2-3次； 3.2.4 将培养板置于显微镜下观察成骨染色效果（如图2所示）。