人间充质干细胞成脂分化试剂盒
产品基本信息
产品名称 Applied Cell® 人间充质干细胞成脂分化试剂盒
货 号 AC-1001029
规 格 1kit
保存条件 基础培养基2-8℃,添加剂-20--80℃保存; 混合后2-8℃保存,2-3周内使用完毕
使用范围 人间充质干细胞诱导分化成脂
保质期 1年
产品简介 人间充质干细胞成脂分化试剂盒是埃泽思生物(Applied Cell®)*的一款用于人间充质干细胞分化成脂的试剂盒,可用于骨髓、脐带、脂肪等组织来源的间充质干细胞的成脂分化。本产品**于科学研究,不能用于临床诊断、**,以及其他用途。
试剂 规格 数量 运输 人间充质干细胞成脂分化基础培养基 90mL 1瓶 冰袋 人间充质干细胞成脂分化添加剂 10mL 1瓶 干冰 产品内容
产品特性 诱导分化程序简单便捷。 诱导成脂细胞效率高。
操作方法 1. 相关材料 • Xeno-Free人间充质干细胞培养基(Applied Cell®:AC-1001003) • 人间充质干细胞成脂分化试剂盒(Applied Cell®:AC-1001029) • 成脂检测染液(Applied Cell®:AC-1001022) • Xeno-Free细胞消化液(Applied Cell®:AC-1001024/1001025) •盐缓冲液(1×PBS) (Applied Cell®: Cat.AC-1001037) 2.实验准备 人间充质干细胞成脂分化培养基的配制 2.1在2-8℃解冻人间充质干细胞成脂分化添加剂,轻晃摇匀; 2.2 随后将添加剂加入到人间充质干细胞成脂分化基础培养基中(10ml 添加剂与90mL基础培养基彻底混合)混匀,即为人间充质干细胞成脂分化培养基。人间充质干细胞成脂分化培养基可在2-8℃稳定储放2周。 注意:人间充质干细胞脂肪维持添加剂只能在2-8℃解冻,待添加剂加入到培养基以后,请用培养基润洗添加剂瓶1-2次,因添加剂量较少可防止添加剂粘附在试管壁上造成损失。 3. 实验操作 诱导成脂(以6孔板为例) 3.1 将传代或复苏冻存的人间充质干细胞接种到6孔板上,密度为2×10^5 -3×10^5 cells/cm2或2×10^5 -3×10^5 cells/孔,置于37℃,5% CO2培养箱中培养; 3.2 当人间充质干细胞融合度达到80-90 %时,开始诱导脂肪前体细胞分化。吸掉 Xeno-Free人间充质干细胞培养基,每孔加1ml预热PBS清洗一次,吸掉PBS,加入2 ml人间充质干细胞成脂分化培养基,以此记为第0天; 注意:人间充质干细胞成脂分化培养基使用前需预热至37℃。 3.3 每1-2天更换人间充质干细胞成脂分化培养基; 3.4 *5-6天可以看到少量脂滴; 3.5 *9-14天待脂肪滴颗粒成熟即可进行拍照,染色。(根据情况诱导时间可适当延长) 注意:1.培养基每1-2天换液。由于随着脂肪细胞的成熟,pH的降低会观察到培养基变黄。pH从7降到6.5,细胞增殖会变慢。pH在6.5到6时,细胞活力会降低。所以诱导后期,需要每天换液。 2.换液时尽量不使培养基变干,培养基变干会降低细胞层对培养皿表面的粘附。 3.细胞分化效果和供体有关。供体的年龄是一个因素。有研究发现与年长者相比,年轻供体来源的细胞的分化能力更强。 4. 成脂检测染液染色 4.1每6ml成脂染液加入4ml蒸馏水制成染色工作液,混匀室温放置5-10分钟。加入蒸馏水后,染液会有片状结晶析出,可用直接使用或滤网过滤除掉结晶。 4.2脂肪诱导分化结束后,吸掉原有培养基,用1×PBS冲洗1-2次。每孔加入适量细胞固定液, 固定20 min。 4.3吸掉细胞固定液,用1×PBS冲洗2次。,加入适量染色工作液,使染液完全覆盖脂肪滴,室温染色15min。 4.4吸掉染色工作液,用1×PBS冲洗2-3次。 4.5将培养板置于显微镜下观察脂滴染色效果,拍照。 注意:染色后显微镜观察,及时拍照。如果时间过长,脂肪滴会发生破裂。